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科研服務

10x genomics單細胞免疫組庫

技術線路

    10x genomics單細胞免疫組庫測序技術是利用微流體交叉系統將含Barcoded RT Primers的Gel Beads、細胞和酶的混合物、油三者結合形成GEMs,在GEMs中,凝膠珠自動溶解釋放大量barcode序列,同時每個細胞裂解釋放出mRNA,mRNA再逆轉錄產生帶有10x barcode和UMI信息的cDNA。標記后的cDNA被分成2份,一份使用針對TCR/BCR的C區巢式引物擴增,從而富集T細胞或B細胞,獲得TCR/BCR全長VDJ序列,另一份直接構建基因表達的文庫,獲取5’端基因表達的數據。最后使用Illumina測序平臺對文庫進行測序檢測,即可一次性獲得大量單細胞的基因表達和免疫組庫數據,從而實現在單細胞水平進行免疫組庫測序的目的。該技術將免疫組庫測序和轉錄組測序結合起來,可觀察在不同的細胞亞群里面免疫組庫多樣性的情況。

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    10x genomics單細胞免疫組庫測序技術是利用微流體交叉系統將含Barcoded RT Primers的Gel Beads、細胞和酶的混合物、油三者結合形成GEMs,在GEMs中,凝膠珠自動溶解釋放大量barcode序列,同時每個細胞裂解釋放出mRNA,mRNA再逆轉錄產生帶有10x barcode和UMI信息的cDNA。標記后的cDNA被分成2份,一份使用針對TCR/BCR的C區巢式引物擴增,從而富集T細胞或B細胞,獲得TCR/BCR全長VDJ序列,另一份直接構建基因表達的文庫,獲取5’端基因表達的數據。最后使用Illumina測序平臺對文庫進行測序檢測,即可一次性獲得大量單細胞的基因表達和免疫組庫數據,從而實現在單細胞水平進行免疫組庫測序的目的。該技術將免疫組庫測序和轉錄組測序結合起來,可觀察在不同的細胞亞群里面免疫組庫多樣性的情況。

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